Roh Yoon-seo memulai kariernya sebagai model sebelum debut akting dalam drama Our Blues (2022), di mana ia memerankan seorang siswi hamil dan mendapatkan pujian kritis. Ia juga tampil dalam film 20th Century Girl (2022) dan drama Crash Course in Romance (2023), yang memperkuat posisinya sebagai aktris muda berbakat. Dalam Hear Me: Our Summer, ia memerankan Seo Yeo-reum, kakak dari Ga-eul, yang menjadi jembatan komunikasi antara adiknya dan Yong-jun.