Anthony Mackie lahir pada 23 September 1978 di New Orleans, Louisiana, Amerika Serikat. Dia adalah putra dari Martha Gordon dan Willie Mackie Sr., seorang tukang kayu yang memiliki bisnis atap. Mackie tumbuh di lingkungan yang penuh semangat budaya, yang memengaruhi kecintaannya terhadap seni sejak usia muda.

Dia menempuh pendidikan di New Orleans Center for Creative Arts sebelum melanjutkan ke North Carolina School of the Arts. Keinginan Mackie untuk menjadi aktor membawanya ke Juilliard School, salah satu institusi seni paling bergengsi di dunia. Peran besar pertamanya datang pada tahun 2002 dalam film 8 Mile bersama Eminem, tetapi ia dikenal luas karena perannya sebagai Sam Wilson/Falcon dalam Marvel Cinematic Universe.

Mackie telah membuktikan dirinya sebagai aktor serba bisa yang dapat memerankan karakter dengan kedalaman emosional, seperti dalam The Hurt Locker (2008), hingga menjadi pahlawan super yang karismatik. Ia kini menjadi bagian penting dari waralaba Marvel dan akan memimpin film Captain America: Brave New World mendatang.